Nota de aplicação: Determine a concentração de proteína total em lisados celulares com a leitora de microplaca SpectraMax ABS Plus

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Data da Publicação 07/23/2020
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Nota de aplicação: Determine a concentração de proteína total em lisados celulares com a leitora de microplaca SpectraMax ABS Plus
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A quantificação das concentrações de proteínas a partir de lisados celulares é uma etapa fundamental para muitas aplicações, tais como Western Blots e ELISA. Dois dos ensaios mais populares são colorimétricos, dependente da mudança de cor de um reagente na presença de proteína. O ensaio Bradford baseia-se na mudança de absorbância do corante azul de Coomassie de 465 nm (não ligado) para 595 nm (ligado). O ensaio do ácido bicinconínico (BCA) baseia-se em duas reações: (1) a proteína reduz o Cu2+ para Cu1+ e (2) o ácido bicinconínico se liga ao Cu1+, formando um complexo de cor púrpura que absorve fortemente a luz em 562 nm.
A nota de aplicação descreve o uso dos kits Pierce Rapid Gold BCA Protein Assay e Pierce Detergent Compatible Bradford Assay para quantificar a proteína total em lisados celulares. O ensaio BCA padrão requer uma incubação de 30 minutos a 37 °C, mas o ensaio Rapid Gold BCA requer apenas uma incubação de 5 minutos à temperatura ambiente e a absorbância é medida em 480 nm. O kit Pierce Detergent Compatible Bradford Assay elimina os problemas encontrados quando o corante Coomassie é usado com células lisadas em tampões contendo detergentes. Ambos os ensaios foram lidos na leitora de microplacas SpectraMax® ABS Plus (Molecular Devices). Protocolos pré-configurados no Software SoftMax® Pro (Molecular Devices) foram usados para adquirir dados e traçar curvas padrão a partir das quais as concentrações de lisados celulares foram determinadas.

Clique no link para acessar a nota de aplicação:
https://www.moleculardevices.com/sites/default/files/en/assets/app-note/br/measure-total-protein-in-cell-lysates-with-spectramax-abs-plus-microplate-reader.pdf